基因工程名词解释和问答

1、基因工程（genetic engineering）： 就是在分子水平上，提取（或合成）不同生物的遗传物质（基因），在体外切割，再和一定的载体拼接重组，然后把重组的DNA 分子引入细胞或生物体内，使这种外源DNA（基因）在受体细胞中进行复制与表达，按人们的需要繁殖扩增基因或生产不同的产物或定向地创造生物的新性状，并能稳定地遗传给下代。

2、载体(vector)：基因工程中，携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。

3、限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）：定义：是一类能识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。 主要从原核生物中分离纯化出来。

4、1）同裂酶（isoschizomers）： 来源不同，识别位点和切割位点均相同的限制性内切酶。即同裂酶产生同样的切割，形成同样的末端。同裂酶对识别序列的甲基化状态有不同的限制性反应。2）同尾酶（isocaudamer）：来源不同，识别序列也不相同，但切出的DNA的片段具有相同的末端序列。3）同位酶：识别序列相同，但切割位点不同。

5、酶活性单位：1个酶活性单位就是指1min能转化1mmol底物的酶量。

6、DNA连接酶：能催化双链DNA的片段靠在一起的3′羟基末端和5′端磷酸基团末端之间形成的磷酸二酯键，使两末端连接的一种核酸酶。

7、DNA聚合酶：作用是指在引物和模板的存在下，把脱氧核糖核苷酸（dNTP）连续地加到引物链的 3’ –OH 末端，催化核苷酸的聚合作用。

8、DNA连接酶能够封闭双螺旋DNA骨架上的缺口，但不能封闭裂口。缺口（nick）：即在双链DNA的某一条链上两个相邻核苷酸之间失去一个磷酸二酯键所出现的单链断裂；

9、常用连接酶：http://www.ahsrst.cnli DNA 连接酶 、T4 DNA 连接酶（常用）。既能进行粘性末端的连接，又能进行平末端的连接，但http://www.ahsrst.cnli DNA 连接酶进行平末端连接的效率低。

10、DNA连接酶的连接条件：必须是两条双链DNA、一条链的3‘末端有游离的羟基（-OH），而另一条链的5’端具有一个磷酸基团（-P）、需要能量（ATP或NAD+）。

11、T4多核苷酸激酶：是一种磷酸化酶，可将ATP的磷酸基团转移到DNA或RNA的5‘末端。1）5‘加磷酸基团。对于缺乏5‘磷酸的DNA或合成接头进行磷酸化。2）末端标记。

12、末端转移酶TDT 来源：小牛胸腺 活性：不依赖模板的 DNA 聚合酶，能催化 dNTP 掺入 DNA 3′-OH 末端。当反应液中只有一种脱氧核苷酸时，可形成仅有一种核苷酸组成的3′尾巴，称之为同聚物加尾。功能：1）主要用于给外源DNA的片段及载体分子加上互补的同聚物尾巴，便于连接。2）末端标记

13、碱性磷酸酶：细菌碱性磷酸酶（bacterial alkaline phosphatase，简称BAP）、小牛肠碱性磷酸酶（calf intestinal alkaline phosphatase，简称CIP）特性：催化除去DNA或RNA 5′端的磷酸基团。功能：1）DNA分子片段5′末端的去磷酸化，防止自身连接。2）可作为5′-末端标记的DNA的片段。

14、分子杂交技术：分子杂交是用于检测混合样品中特定的核酸分子和蛋白质分子是否存在，以及其相对分子质量的大小的一种方法。杂交技术：是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性，对某一特异性DNA序列进行探查的技术。

15、Southern杂交(预杂交、杂交、洗膜) 分子杂交：预杂交： 将结合了 DNA 分子的滤膜先与特定的预杂液进行预杂交，也就是将滤膜的空白处用鱼精 DNA 或牛奶蛋白封闭起

来，防止在杂交过程中滤膜本身对探针的吸附。杂交：在一定的溶液条件和温度下，将标记的核酸探针与滤膜混合，如果滤膜上的 DNA 分子存在与探针同源的序列，那么探针将与该分子形成杂合双链，从而吸附在滤膜上。洗膜： 经过一定的洗涤程序将游离的探针分子除去。

16、探针（probe）：用作检测的被标记的短片段特异DNA或RNA序列。

17、探针的种类：基因组DNA探针、 cDNA 探针、寡核苷酸探针、RNA探针

18、标记物：同位素标记：32P、35S、3H等。非同位素标记：地高辛、生物素、荧光素等

19、Northern 杂交：检测特定RNA（主要是mRNA）分子的方法。与Southern杂交的不同：靶核酸：RNA RNA电泳: 变性凝胶电泳 应用：主要用于分析mRNA分子大小及mRNA的转录情况

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